DNA琼脂糖胶电泳实验中,TAE缓冲液的作用是什么 dna琼脂糖电泳实验报告

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一、琼脂糖凝胶电泳中dna分子迁移率受哪些因素的影响?

二、DNA琼脂糖电泳试验中GoldView试剂的用途是什么?

三、DNA琼脂糖胶电泳实验中,TAE缓冲液的作用是什么

一、琼脂糖凝胶电泳中dna分子迁移率受哪些因素的影响?

影响因素很多。主要的有:

DNA的分子大小1、线性双链DNA分子在一定浓度的琼脂糖凝胶中的迁移率与DNA分子量的对数成反比。分子越大,阻力越大,迁移越慢。

琼脂糖浓度给定大小的线性DNA分子在不同浓度的琼脂糖凝胶中具有不同的迁移速度。分离小于0.5kb的DNA片段所需的凝胶浓度为1.2-1.5%,分离大于10kb的DNA分子所需的凝胶浓度为0.3-0.7%,分离它们之间的DNA片段所需的凝胶浓度为0.8-1.0%。

3、 DNA分子构象相同分子量的线性、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中运动速度不同,其中超螺旋DNA运动最快,线性双链DNA运动最慢。

4、当电源电压较低时,线性DNA片段的迁移率与施加的电压成正比。但随着电场强度的增加,不同分子量的DNA片段的迁移率会有不同程度的增加。片段越大,场强增加引起的迁移率增加越大,所以琼脂糖凝胶的有效分离范围会随着电压的增加而减小。为了最大化大于2kb的DNA片段的分辨率,施加的电压不应超过5v/cm。

5、包埋染料的存在荧光染料溴化乙锭用于检测琼脂糖凝胶中的DNA。染料将嵌入堆叠的碱基对之间,并拉伸线性和有缺口的环状DNA,使其更加刚性,并将线性DNA迁移率降低15%。

离子强度影响电泳缓冲液的组成,并且离子强度影响DNA的电泳迁移率。在没有离子的情况下(比如用蒸馏水配制凝胶),电导率最小,DNA几乎不动。在高离子强度的缓冲液中(如误加10倍电泳缓冲液),电导率很高,明显发热,严重时会引起凝胶熔化或DNA变性。

二、DNA琼脂糖电泳试验中GoldView试剂的用途是什么?

GoldView是一种可替代溴化乙锭(EB)的新型菁核酸染料。琼脂糖电泳检测DNA时,金维与核酸结合能产生很强的荧光信号,比EB灵敏5-10倍,使用方法完全相同。

与核酸结合后,金维的最大吸收峰为497nm,在254nm处也有一个强吸收峰,发射波长为520nm。在紫外透射光下,双链DNA呈现绿色荧光,也可用于RNA染色。

三、DNA琼脂糖胶电泳实验中,TAE缓冲液的作用是什么

(1)缓冲液在电泳中的作用之一是维持适当的pH值。电泳时,正极和负极都会发生电解反应,正极会发生氧化反应(4oh-4e-2h2o2),负极会发生还原反应(4H 4e-2H2)。长时间电泳会使正极呈酸性,负极呈碱性。好的缓冲体系要有很强的缓冲能力,使溶液两极的pH值基本保持不变。(2)电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性,有利于DNA分子的迁移。比如一般的电泳缓冲液要含有0.01-0.04mol/L的Na离子,Na离子浓度太低电泳速度会变慢;过高时,会造成电流过大,使胶水发热甚至融化。(3)电泳缓冲液的另一种成分是EDTA,EDTA的浓度为1-2mmol/L,以螯合Mg2血浆,防止电泳时DNA酶的激活,也防止Mg2离子与核酸沉淀。

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